微量DNA产物纯化试剂盒说明书

MicroDNA Purification Kit

  目录号：  YJ0520

 保   存：  室温

 组分说明                                        

           

                                        Cat.No.                  YJ0520

                                        KitSize                     50

                                       BufferPB                   30ml

                                       BufferPS                   15ml

                              BufferPW（concentrate）               10ml

                                       BufferEB                   10ml

                                   SpinColumnDS                    50

                               CollectionTube（2ml）                 50

 产品简介

     本试剂盒是专门针对微量PCR产物及一些酶反应液（酶切，连接，探针标记等）而设计的，利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积（可少至10µl）,从反应液中快速纯化50bp-50kb的DNA片段，纯化过程中可去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，可获得高纯度，高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收的DNA可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

 注意事项

 1.   本试剂盒适用于无选择性地回收溶液中所有的DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒（YJ0524，YJ2302，YJ0518或YJ0526）。

 2.   第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 BufferPW 中加入无水乙醇。

 3.   使用前请检查 BufferPB 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在 37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

 4.   回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

 5.   所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。

 自备：无水乙醇，离心管  

操作步骤

1.    估计PCR反应液或酶切反应液的体积，加入5倍体积的Buffer PB，充分混匀（如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBufferPB，无需去除石蜡油或矿物油）。

      注意：在加入BufferPB后检测溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸钠（pH5.0），从而将pH值调到5-7。

2.    柱平衡：向已装入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 µl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

3.    将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

      注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl可分批加入。

4.    向吸附柱中加入650 µl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

      注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。

5.    12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

      注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

6.   将吸附柱置于一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加10-30 µl Buffer EB，室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

      注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。 

            2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤6。

            3）洗脱体积不应小于10μl，体积过少影响回收效率。

            4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

            5）回收大于10kb的DNA片段时，BufferEB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

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