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植物miRNA及piRNA的逆转录

作者:杭州联科生物技术股份有限公司 2014-09-29T14:26 (访问量:2823)


miRNA在植物的发育、抗病、和应激反应中发挥着重要作用。一般认为,这些小的非编码RNA通过靶向mRNA剪切,在后转录水平调节植物的基因表达。这些基因表达中的靶向变化由数百个成熟miRNA的差异表达所调控,每个成熟miRNA结合在靶mRNA的特定序列上。因此,对植物的成熟miRNA调控和表达进行分析,能够为植物的组织发育、干旱保护及疾病防御机理提供宝贵信息。目前基本无法通过qRT-PCR对植物的成熟miRNA进行分析,由于植物miRNA的特性,基于多聚腺苷酸的逆转录反应对其反应效率十分低下。QIAGEN推出了独特的解决方案,能够对植物组织中的成熟miRNA进行通用的逆转录反应。

QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3'端修饰的小RNA的cDNA合成;是针对具有3’端甲基化(2'-O-Me)修饰的小RNA进行无偏差 cDNA合成的通用型试剂盒。本试剂盒专为基于实时定量PCR技术的小RNA表达分析应用设计和优化,能够配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等产品使用。这一类通过功能验证的分析和芯片产品可应用于水稻、玉米、大豆、烟草和其他一些重要农业作物的检测,以及植物学相关的研究。在3’末端碱基具有2'-O-Me甲基化修饰的小RNA(如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA))中,一般不具有poly A尾结构,因此无法通过多聚腺苷酸依赖的cDNA合成方法有效地反转录。专用的miScript Plant RT Kit通过首先向植物miRNA的3'末端连接一个接头解决了这一难题。不同于多聚腺苷酸化,这一链接反应不会受到植物miRNA 3'末端碱基上存在的2'-O-Me甲基化修饰的负面抑制。接头一旦连接成功,即可实现反转录反应。

性 能

miScript Plant RT Kit与miScript Plant qPCR System的联合使用,能够确保针对植物样本实现灵敏和特异性的miRNA检测和定量工作。由于许多miRNA表达丰度很低,因此检测灵敏度对于确保获得可靠数据至关重要。miScript Plant qPCR System能够提供优异的灵敏度,宽广的动态监测范围,以及始终如一的高扩增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能将帮助您于首次尝试时,即在技术重复和生物重复样本之间获得高度可重复的结果。

操作流程

反转录反应可方便地进行。通常在连接反应介导的反转录反应中,一般使用含有3’端2'-O-Me修饰小RNA的总RNA做为起始材料。反转录是一个简单直接的操作步骤,包含了37℃下1小时的温育反应,以及之后在95℃下通过短暂孵育对反应进行失活。

应 用

miScript Plant RT Kit通常做为miScript Plant PCR System的一部分,用于进行:

  • 植物成熟miRNA的定量和表达谱分析
  • piRNA的定量和表达谱分析

相关产品信

产品货号

产品名称

218760

miScript Plant RT Kit (12)

218761

miScript Plant RT Kit (50)

218762

miScript Plant RT Kit (96)

218073

miScript SYBR Green PCR Kit (200)

218075

miScript SYBR Green PCR Kit (1000)

218076

miScript SYBR Green PCR Kit (2000)

218300

miScript Primer Assay (100)

Varies

miScript miRNA PCR Arrays

以上信息来源QIAGEN:

http://www.qiagen.com/cn/products/catalog/assay-technologies/mirna/miscript-plant-rt-kit/#productdetails




阅读原文:http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014090029.html

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